Bloqueio do Receptor de um Hormônio da Fome em Macrófagos Desacelera a Cicatrização do Fígado

A fibrose hepática, na qual a inflamação crônica impulsiona o acúmulo excessivo de tecido cicatricial, afeta centenas de milhões de pessoas em todo o mundo e pode progredir para cirrose e câncer de fígado. No entanto, medicamentos anti-fibróticos eficazes ainda são escassos. Este estudo da Texas A&M investiga um papel anteriormente não reconhecido para o receptor secretagogo do hormônio do crescimento (GHSR) — o receptor do hormônio da fome, a grelina — especificamente dentro dos macrófagos hepáticos, como um fator-chave da doença fibrótica. Os pesquisadores utilizaram um modelo de injeção de CCl4 (2,5 µL/g de peso corporal, duas vezes por semana durante 6 semanas em camundongos machos de 8 a 12 semanas de idade) que induz de forma confiável inflamação hepática e cicatrização, para investigar se o GHSR expresso em macrófagos contribui para a patologia da doença.

Em camundongos do tipo selvagem, a administração de CCl4 elevou dramaticamente o ALT e o AST séricos (marcadores de lesão hepática), aumentou a relação entre o peso do fígado e o peso corporal, e causou balonização dos hepatócitos e deposição pronunciada de colágeno visível na coloração de Sirius Red. Notavelmente, os níveis da proteína GHSR aumentaram acentuadamente no fígado como um todo e especificamente nas células não parenquimatosas (que incluem células imunes), mas não nos hepatócitos, enquanto os macrófagos peritoneais de camundongos tratados com CCl4 também apresentaram GHSR dramaticamente elevado. A análise de sequenciamento de RNA de célula única de um conjunto de dados publicado (GSE136103) confirmou que o CCl4 altera o panorama transcricional dos macrófagos, ativando as vias de sinalização TLR, TNF, NF-κB e FoxO e regulando positivamente funções moleculares relacionadas à GTPase — todas consistentes com o envolvimento do GHSR.

Usando camundongos com nocaute de Ghsr específico para macrófagos (Ghsr-MϕKO, gerados pelo cruzamento de camundongos Ghsr-floxed com LysM-Cre), a equipe demonstrou que a deleção do GHSR em macrófagos protegeu substancialmente contra a lesão hepática induzida por CCl4. O ALT sérico caiu 32,0% e o AST 26,2% em camundongos Ghsr-MϕKO em comparação com os controles (Ghsr-f/f) sob desafio com CCl4. As avaliações histológicas — H&E, Sirius Red, Masson Trichrome e coloração de αSMA — mostraram, todas, fibrose e infiltração de macrófagos significativamente reduzidas (coloração Mac-2). A expressão gênica de fibrose (Col1a1, Col1a2, Acta2, Tgfb1) foi correspondentemente suprimida, assim como as citocinas pró-inflamatórias TNFα e IL-1β. A citometria de fluxo revelou que os camundongos Ghsr-MϕKO apresentavam menos macrófagos derivados de monócitos infiltrantes (MDMs) e uma proporção menor de macrófagos pró-inflamatórios polarizados para M1 no fígado.

Mecanisticamente, o estudo identifica um eixo GHSR→PKA→Foxo1 como a via crítica. A ativação do GHSR aumenta a atividade da PKA, que fosforila o Foxo1 na serina 273 (pFoxo1-S273). Este sítio de fosforilação não canônico promove a atividade transcricional do Foxo1 para alvos inflamatórios e pró-fibróticos — notadamente o TGF-β1 — em vez da exclusão nuclear típica associada à fosforilação de Foxo1 mediada pela Akt. Experimentos de co-cultura confirmaram que o meio condicionado de macrófagos com GHSR intacto ativa fortemente as células estreladas hepáticas (HSCs), como demonstrado pelo aumento da expressão de αSMA, enquanto o meio condicionado de macrófagos Ghsr-KO ou o meio neutralizado com TGF-β1 não produziram esse efeito. Para validar ainda mais o mecanismo Foxo1-S273 in vivo, a equipe introduziu uma mutação fosfomimética Foxo1-S273D em camundongos. Esses animais apresentaram inflamação hepática e fibrose induzidas por CCl4 exacerbadas em comparação com os controles do tipo selvagem, confirmando que o pFoxo1-S273 constitutivo é suficiente para agravar os desfechos fibróticos.

Clinicamente, esses achados são significativos porque o GHSR é um receptor acoplado à proteína G — uma classe de alvo farmacológico bem validada. Vários antagonistas do GHSR já existem e foram avaliados para obesidade. O reposicionamento ou o refinamento de tais compostos para direcionar o GHSR em macrófagos poderia oferecer uma nova abordagem imunoterapêutica para a fibrose hepática. As ressalvas incluem o uso exclusivo de camundongos machos (limitando a generalização para fêmeas), a dependência de um modelo de toxina química em vez de modelos de fibrose metabólica ou viral, e as diferenças inerentes entre a biologia dos macrófagos de camundongos e humanos.