Metabólitos Ocultos do Pexidartinib Mapeados em Camundongos, Revelando Vias Tóxicas

Pexidartinib (PEX, TURALIO®) é um inibidor de tirosina quinase que tem como alvo CSF1R e c-KIT, aprovado para o tratamento de tumor de células gigantes tenossinovial. Apesar de sua utilidade clínica, o PEX carrega um aviso de caixa preta da FDA devido a relatos de lesão hepática grave e fatal. O mecanismo subjacente dessa hepatotoxicidade permanece desconhecido, e estudos farmacocinéticos humanos anteriores com PEX radioativamente marcado deixaram aproximadamente 28% da radioatividade recuperada quimicamente não identificada — sugerindo lacunas significativas na compreensão de seu destino metabólico.

Para abordar essa questão, pesquisadores administraram PEX por via oral a camundongos machos C57BL/6NJ (80 mg/kg) e coletaram amostras de fezes, urina, plasma e fígado. Utilizando LC de ultra-alta eficiência acoplada a um espectrômetro de massa Q Exactive Orbitrap de alta resolução, combinado com metabolômica não direcionada e quimiometria OPLS-DA, a equipe realizou um perfil abrangente de metabólitos em todos os quatro tipos de amostras.

Trinta dos 31 metabólitos de fase I previamente caracterizados em microssomas hepáticos humanos e de camundongos foram detectados in vivo em camundongos, confirmando forte concordância entre espécies no metabolismo de fase I do PEX. De forma crítica, o estudo identificou 28 metabólitos de fase II não observados anteriormente in vivo: 12 glicuronídeos, 6 sulfatos, 1 conjugado de glicose, 2 adutos de glutationa (GSH), 1 aduto de cisteinil-glicina e 6 adutos de N-acetilcisteína (NAc) — 24 dos quais nunca haviam sido relatados anteriormente. A detecção de adutos GSH-PEX e seus produtos de degradação subsequentes (incluindo adutos de NAc) fornece a primeira evidência direta in vivo de que o PEX gera metabólitos reativos capazes de se ligar a macromoléculas, consistente com achados in vitro anteriores em hepatócitos humanos.

As fezes foram a via de excreção dominante para o PEX inalterado, com abundância fecal de PEX 1.574 vezes maior por unidade de volume do que na urina — espelhando dados farmacocinéticos humanos. No plasma, o metabólito hidroxilado M2 (38,7%), a cetona M7 (12,5%) e o fragmento aminopiridina M12 (19,5%) foram as espécies circulantes dominantes. No fígado, M12 (aminopiridina, 37,1%), M7 (17,3%) e o PEX dioxidado M8 (11,9%) predominaram, sugerindo acúmulo hepático de metabólitos oxidativos específicos. Importante destacar que produtos de reações incomuns de clivagem de ligações carbono-carbono — previamente identificados em microssomas — foram confirmados in vivo e seus conjugados de fase II caracterizados pela primeira vez.

Esses achados têm implicações significativas para a compreensão da hepatotoxicidade do PEX. Os intermediários reativos capturados como adutos de GSH e NAc podem modificar covalentemente proteínas e DNA, potencialmente desencadeando lesão hepática mediada por mecanismos imunológicos ou citotoxicidade direta. A abordagem metabolômica utilizada aqui detectou metabólitos que seriam ignorados por métodos baseados em radioativamente marcados, particularmente aqueles que perdem o carbono marcado durante a clivagem C-C. Este trabalho fornece um mapa metabólico para estudos mecanísticos futuros, incluindo o uso de modelos de camundongos knockout para CYP3A, para isolar quais metabólitos estão causalmente ligados ao dano hepático.