Il blocco di NNMT riduce drasticamente l'aterosclerosi rimodellandoil metabolismo NAD+ dei macrofagi

**Perché questo è importante:** L'accumulo di macrofagi nelle placche arteriose è un fattore centrale nell'aterosclerosi, tuttavia i segnali metabolici che controllano il numero di macrofagi nelle lesioni rimangono ancora incompletamente compresi. Questo studio colloca il metabolismo del NAD+ — studiato a lungo nell'invecchiamento e nelle malattie metaboliche — al centro della biologia dei macrofagi nelle placche, aprendo una via potenzialmente farmacologicamente accessibile.

**Cosa è stato studiato:** Il gruppo di ricerca ha avviato il lavoro con uno studio GWAS nel modello di aterosclerosi Hybrid Mouse Diversity Panel (HMDP), che ha indicato un locus sul cromosoma 9 contenente *Nnmt*. NNMT metila la nicotinamide (NAM) per produrre N-metilnicotinamide, sottraendo così NAM al pool disponibile per la sintesi di NAD+ tramite la via di recupero. Per verificare la causalità, i ricercatori hanno utilizzato un ASO di Ionis (50 mg/kg/settimana i.p.) in topi iperlipidемici APOE-Leiden.CETP alimentati con una dieta di tipo occidentale per 16 settimane. Hanno poi analizzato i contributi tessuto-specifici mediante siRNA mirato al fegato e al tessuto adiposo, e i contributi ematopoietici tramite trapianto di midollo osseo (BMT) da donatori *Nnmt* knockout (KO) o privi di CD38 in ricevitori iperlipidемici irradiati. La proliferazione e l'apoptosi dei macrofagi sono state quantificate in vivo mediante incorporazione di EdU e colorazione TUNEL di sezioni aortiche, e confermate in macrofagi derivati dal midollo osseo (BMDMs) coltivati da topi eterozigoti KO.

**Risultati principali:** Il trattamento globale con NNMT-ASO ha ridotto l'area della lesione della radice aortica da 5 a 10 volte sia nei topi maschi che nelle femmine, senza variazioni significative nei profili lipidici plasmatici, escludendo un meccanismo mediato dai lipidi. Il silenziamento mediante siRNA mirato a fegato e tessuto adiposo — i tessuti con la maggiore espressione di NNMT — ha avuto scarso effetto o nessun effetto sulle dimensioni delle lesioni; analogamente, la somministrazione di NAM esogena ai topi non ha ridotto l'aterosclerosi, escludendo un aumento sistemico della NAM come mediatore. Il BMT da donatori *Nnmt* KO ha ridotto significativamente la proliferazione dei macrofagi nelle lesioni (cellule EdU⁺/CD68⁺), aumentato l'apoptosi dei macrofagi (cellule TUNEL⁺/CD68⁺) e ridotto l'area della placca rispetto ai donatori wild-type. Risultati analoghi sono stati ottenuti con donatori BMT privi di CD38. Nei BMDMs coltivati, le cellule *Nnmt* KO eterozigoti hanno mostrato rapporti NAD+/NADH elevati, ridotta positività per Ki-67 e EdU, e maggiore positività per TUNEL rispetto alle cellule wild-type, collegando direttamente livelli intracellulari di NAD+ più elevati al fenotipo antiproliferativo e pro-apoptotico.

**Implicazioni:** I risultati stabiliscono una catena meccanicistica: l'attività di NNMT nei macrofagi esaurisce la NAM disponibile per la sintesi di NAD+ tramite la via di recupero → livelli più bassi di NAD+ sopprimono la segnalazione pro-apoptotica e antiproliferativa → più macrofagi si accumulano nelle placche → lesioni più estese. CD38 agisce parallelamente consumando NAD+, e la sua inibizione ricapitola la perdita di funzione di NNMT. Ciò suggerisce che strategie volte ad aumentare il NAD+ nei macrofagi — tramite inibizione di NNMT, inibizione di CD38 o supplementazione con precursori del NAD+ mirata ai macrofagi — potrebbero ridurre il carico aterosclerotico indipendentemente dalla riduzione dei lipidi.

**Limiti:** Tutti gli esperimenti sono stati condotti in topi su un background transgenico iperlipidемico altamente artificiale, e la traduzione alla malattia cardiovascolare umana richiede validazione. L'ASO utilizzato determina un silenziamento globale (non specifico per tipo cellulare), e gli studi con KO completo si sono basati su riduzioni eterozigoti nei macrofagi, suggerendo che l'entità dell'effetto negli esseri umani con variazione naturale dell'attività di NNMT potrebbe essere più modesta. La sicurezza a lungo termine dell'inibizione sistemica di NNMT o CD38 — considerati i loro ampi ruoli nella biologia della metilazione e del NAD+ — non è stata valutata.