Il Flavonoide Naturale Acacetin Agisce su LAMTOR1 per Potenziare l'Autofagia e Invertire il Fegato Grasso

La disfunzione metabolica associata alla steatosi epatica (MAFLD) colpisce centinaia di milioni di persone nel mondo e può progredire verso la steatoepatite, la cirrosi e il carcinoma epatocellulare. Nonostante il suo enorme impatto, non esistono terapie approvate dalla FDA, il che rende urgente l'identificazione di nuovi bersagli molecolari e agenti terapeutici. L'autofagia—il processo cellulare di riciclaggio che elimina organelli danneggiati e gocciole lipidiche—è compromessa nella MAFLD, e il suo ripristino è emerso come una strategia terapeutica promettente.

Questo studio ha indagato l'acacetin (ACA), un 5,7-diidrossi-4′-metossiflavone isolato dalla menta coreana (Agastache rugosa), in un modello murino con dieta iperlipidica carente di colina e aminoacidi definiti (CDAHFD), che riproduce rapidamente la patologia umana della MASH. I topi trattati con ACA (10 mg/kg i.p. a giorni alterni per 4 settimane) hanno mostrato una riduzione degli enzimi epatici sierici (GOT1/AST diminuita di circa il 35%; GPT/ALT significativamente ridotta), una minor quantità di lipidi epatici evidenziati con Oil Red O, una marcata diminuzione dell'area fibrotica positiva alla colorazione di Masson, e una minore infiltrazione di macrofagi ADGRE1/F4/80. ACA ha inoltre aumentato VMP1, un marcatore precoce di autofagia, nel tessuto epatico, e ha ridotto l'accumulo lipidico negli adipociti 3T3-L1 in vitro attraverso l'induzione dell'autofagia, confermata da saggi di flusso con LC3.

Per identificare il bersaglio molecolare di ACA senza l'uso di marcatori chimici, il gruppo di ricerca ha combinato la Drug Affinity Responsive Target Stability (DARTS) con la proteomica LC-MS/MS. Tra le proteine che mostravano una protezione ACA-dipendente dalla digestione con pronasi, LAMTOR1—una proteina scaffold della membrana lisosomiale che ancora il complesso Ragulator/LAMTOR—è risultata il bersaglio principale. Il Cellular Thermal Shift Assay (CETSA) e il Proximity Ligation Assay (PLA) hanno confermato il legame diretto ACA-LAMTOR1 in cellule intatte. Il trattamento con ACA ha indotto la dissociazione di LAMTOR1 dai partner del complesso LAMTOR (LAMTOR2–5) e dalle GTPasi RRAGA/B, indispensabili per il reclutamento di MTORC1 alla superficie lisosomiale. Di conseguenza, l'attività di MTORC1 (valutata tramite la fosforilazione di RPS6KB1/p70S6K e ULK1) è risultata soppressa, AMPK è stato attivato e il flusso autofagico è aumentato—come evidenziato dall'accumulo di LC3-II, dalla degradazione di SQSTM1/p62, dalle variazioni del reporter tandem mRFP-GFP-LC3, dall'attività lisosomiale con DQ-BSA e dalla traslocazione nucleare di TFEB. Il silenziamento di LAMTOR1 con siRNA ha riprodotto tutti questi effetti, e ACA non ha mostrato alcun beneficio aggiuntivo rispetto al silenziamento, confermando un'azione sul bersaglio specifico.

Sul piano funzionale, l'induzione dell'autofagia da parte di ACA ha richiesto una funzione lisosomiale intatta: il co-trattamento con clorochina ha bloccato la clearance lipidica. Il ribilanciamento MTORC1-AMPK ha inoltre ripristinato la segnalazione metabolica compromessa nel fegato steatosico. Nel modello CDAHFD, il trattamento con ACA ha aumentato LC3-II epatico e ridotto il carico di gocciole lipidiche in modo coerente con un potenziamento della lipofagia. Nel loro insieme, questi dati identificano l'asse LAMTOR1→MTORC1→AMPK→autofagia come una via terapeutica coerente modulata da ACA.

Lo studio si distingue per l'utilizzo dell'identificazione del bersaglio senza marcatori (DARTS-LC-MS/MS) per passare dal fenotipo al meccanismo, e per la validazione genetica che rafforza il legame causale tra l'inibizione di LAMTOR1 e il beneficio metabolico. LAMTOR1 emerge come un bersaglio in precedenza sottovalutato ma accessibile per lo sviluppo di farmaci contro la MAFLD.