Strutture Linfoidi che Infiltrano il Tumore Predicono la Risposta all'Immunoterapia nel Cancro Gastrico

Il cancro gastrico (GC) è la terza causa di morte per cancro a livello mondiale e, sebbene gli inibitori dei checkpoint immunitari abbiano migliorato i risultati clinici, circa il 25–40% dei pazienti con malattia avanzata non risponde alla immunoterapia di prima linea. Sono urgentemente necessari biomarcatori migliori per identificare chi risponderà al trattamento. Le strutture linfoidi terziarie—aggregati immunitari organizzati simili ai linfonodi che si formano all'interno e attorno ai tumori—sono emerse come promettenti indicatori prognostici, ma la loro localizzazione spaziale rispetto al tumore sembra essere importante quanto la loro semplice presenza.

I ricercatori hanno arruolato 110 pazienti con GC per l'analisi istopatologica e di sopravvivenza, quindi hanno profilato 25 campioni con sequenziamento dell'RNA a singola cellula (88.100 cellule di alta qualità) e 5 campioni con trascrittomica spaziale. I tumori sono stati stratificati in tre gruppi: TLS intratumorale (iTLS), TLS peritumorale (pTLS) e TLS-desert (dTLS). L'analisi di Kaplan–Meier ha confermato che i pazienti con iTLS-GC presentavano una sopravvivenza globale e libera da progressione significativamente superiore rispetto ai gruppi pTLS e dTLS, nonché un tasso più elevato di risposta all'immunoterapia.

Le analisi a singola cellula e spaziali hanno rivelato che i tumori ricchi di iTLS sono selettivamente arricchiti di quattro popolazioni di cellule immunitarie: linfociti T CXCL13+, cellule B del centro germinativo CXCR5+, cellule dendritiche attivate LAMP3+CD80+ e cellule endoteliali delle venule ad alto endotelio (HEV) SELP+ACKR1+. La modellizzazione delle interazioni cellula–cellula e gli esperimenti funzionali hanno delineato un asse meccanicistico in cui le cellule HEV che esprimono VCAM1 e ICAM1 reclutano e attivano i linfociti T CXCL13+ tramite la via CXCL13-ACKR1; questi linfociti T promuovono poi la maturazione delle TLS attraverso il crosstalk CXCL13-CXCR5 con le cellule B. La trascrittomica spaziale ha confermato in situ questa architettura cellulare, con i moduli genici associati alle TLS (CCL19, CXCL13, CXCR4, MS4A1) concentrati in cluster spaziali intratumorali in gran parte assenti nei campioni dTLS.

Sulla base di questi risultati, il gruppo di ricerca ha costruito una firma TLS a singola cellula/spaziale (ssTLS) che cattura l'ecosistema cellulare iTLS. Questa firma multigienica ha dimostrato un valore predittivo per i risultati dell'immunoterapia in coorti indipendenti di GC, superando le prestazioni di biomarcatori esistenti come il PD-L1 CPS da solo. I risultati suggeriscono che la profilazione delle TLS con risoluzione spaziale, potenzialmente operativizzata attraverso la firma genica ssTLS, potrebbe guidare la selezione dei pazienti per l'immunoterapia e identificare i candidati a strategie di combinazione volte a indurre le TLS.

I limiti includono la dimensione campionaria modesta per la trascrittomica spaziale (n=5), la natura retrospettiva delle analisi di sopravvivenza e il fatto che tutti i campioni per il sequenziamento dell'RNA a singola cellula provenivano da pazienti naive al trattamento, il che potrebbe non rappresentare pienamente le dinamiche delle TLS durante la terapia. Prima di un'implementazione clinica è necessaria una validazione prospettica in coorti più ampie e multi-etniche sottoposte a regimi di immunoterapia standardizzati.